1 原  理 

本方法是通過將細菌污染于抗菌制品表面，然后用塑料薄膜覆蓋，使細菌與抗菌制品表面充分接觸，以測定其抗菌效果。適用于抗菌塑料、抗菌地板、抗菌瓷磚等產品的抗（抑）菌效果測定。

2 實驗器材 

（1）實驗菌株  金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC 10231），也可根據抑菌劑特定用途選用其他菌株

（2）磷酸鹽緩沖液 

（3）培養基  胰蛋白胨大豆瓊脂培養基（TSA）胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB）與沙堡瓊脂培養基 

（4）薄膜 不影響細菌生長和不吸水的材料，厚度不規定，使用一面應有較好的粘合性，面積為 40mm±2mm的正方形   

（5）無菌塑料袋

（6）恒溫水浴箱

（7）37℃恒溫培養箱 

（8）樣片  將試樣及對照試樣（與試樣同質不含抗菌組分）分別制成邊長為 50mm±2mm的正方形，其中抗菌樣片3個，對照樣片6個。試驗前，以脫脂棉蘸取酒精輕輕擦拭樣片 2～3次，充分干燥

3  操作程序 

（1）傾注瓊脂培養基平板。 

（2）將菌懸液用1/500的營養肉湯稀釋成2.5×105cfu/mL～1.0×106cfu/mL實驗用菌懸液。 

（3）將樣片試驗面朝上放于無菌平皿中，取 0.4mL 菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。按圖表示的方法用薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，使菌液均勻散開，蓋上平皿蓋。如圖2-3 

（4）將裝有接種過菌液的試驗樣片的平皿（3個抗菌樣片和3個對照樣片），置35℃±１℃，相對濕度不低于 90% 的條件下，培養箱內培養24ｈ±１ｈ。

（5）洗脫  以無菌操作方式用鑷子將覆蓋膜和試驗樣片放入塑料袋中，然后加入10mL 肉湯培養液，用手充分揉搓袋中的試驗樣片和覆蓋薄膜，將細菌洗下。    

（6）吸取 1mL 洗下的菌液，至含 9mL PBS的試管中，做系列10倍稀釋，取適當稀釋度接種２個平皿，以傾注法加入 15mL～20mL TSA，置 35℃±１℃恒溫培養箱內培養 40h～48h。 

（7）將另 3 個對照樣片接種后立即用鑷子將覆蓋膜和試驗樣片放入塑料袋中，洗脫和接種方法與試驗樣片相同。 

（8）以試驗用同批次稀釋液、培養基等分別設陰性對照。

（9）試驗重復3次。

4 活菌數的計算  

Ｎ＝Ｃ×Ｄ×Ｖ 

Ｎ：為活菌數 

Ｃ：為2個平板的平均菌落數

Ｄ：為稀釋倍數 

Ｖ：為洗脫用肉湯培養基的液體的毫升數 

5 結果的計算與判定 

（1）試驗成立應符合的條件

1）各次試驗陰性對照均無菌生長 

2）對照樣片接種后直接求出活菌數的對數值符合下列公式                    

（Lzui大值 - Lzui小值）/L平均值≤0.2  

公式中，Lzui大值   zui大活菌數的對數值 

        Lzui小值   zui小活菌數的對數值 

        L平均值   平均活菌數的對數值 

3）對照樣片接種后的活菌數平均值應為 1.0×105cfu/樣片～4.00×105cfu/樣片

4）覆蓋了薄膜的對照樣片培養 24h后的活菌數，每樣片均不少于 1.0×104cfu。 

（2）抗菌活性值的計算： 

                R=log（B/A）-log（C/A）=log（B/C）              

  R: 抗菌活性值 

  A: 對照樣片在接種后的活菌數的平均值 

  B：對照樣片在接種后培養24h的活菌數的平均值

  C：抗菌樣片在接種后培養24h的活菌數的平均值 

（3）評價規定 

各次試驗抗菌活性值均≥2.0，判定該試樣具有抗菌作用。

6 注意事項 

（1）用薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，以免菌液溢出薄膜外。

（2）試驗時應嚴格無菌操作，以防雜菌污染。